小鼠骨骼肌单细胞核提取对照

一、           实验背景

小鼠骨骼肌富含肌纤维、胶原结缔组织，属于抽核高难度样本，极易出现纤维杂质、核团、核破碎，直接干扰 snRNA-seq、ATAC-seq 等测序数据。本次统一小鼠肌肉样本，从研磨方式、震荡参数、密度梯度分层等变量平行对照，通过显微镜镜检直观对比细胞核纯度、完整度、杂质残留情况。

二、统一基础实验条件

1.      样本：成年小鼠后腿骨骼肌，统一称重剪碎；

2.      变量维度：研磨方式、震荡频率

3.      观测标准：长条肌纤维残留量、破碎细胞核占比、细胞核团块数量、背景碎片浑浊度；

4.      观测设备：光学显微镜，统一放大倍数拍摄镜检图。

三、分维度镜检结果分析

（一）研磨方式：手动研磨 VS 仪器研磨

  手动研磨

视野遍布长条肌纤维、大块胶原絮团，组织解离不充分，大量细胞核被纤维缠绕截留，杂质基数极大，后续多层过滤也无法彻底去除，不适合肌肉抽核。

  组织研磨仪（机器研磨）

纤维破碎效率显著提升，长条粗纤维大幅减少，是肌肉样本解离的必备方案。

二）研磨震荡参数：60Hz 长时间 VS 50Hz 温和多次

  60Hz、15s 循环 3 次（高频强震荡）

高强度震荡容易撕裂核膜，视野弥散大量破碎细胞核碎片；仍残留大量短粗肌纤维，后续分层纯化压力大，悬液背景浑浊。

30um细胞筛滤后

  50Hz、10s 循环 5 次（低频率分段研磨）

30um细胞筛滤后

温和分段破碎纤维，在充分解离组织的同时最大程度保护核膜完整；镜下几乎无超长纤维，完整细胞核密度更高，为本实验最优研磨参数。

密度梯度分层：1 层纯化 VS 3 层梯度纯化

         综合最优小鼠骨骼肌抽核完整方案

研磨条件：组织研磨仪 50Hz、10s 间歇循环 5 次温和破碎；

过滤耗材：核维塔 30μm 无菌细胞筛过滤匀浆液，截留大块纤维残渣；

  配套试剂：核维塔肌肉组织专用抽核试剂，稳定保护细胞核完整。

整套方案优势：肌纤维去除彻底、细胞核完整度高、样本损耗少、操作流程精简，完美解决骨骼肌这类高纤维化组织抽核的各类痛点。

本次小鼠骨骼肌抽核平行实验通过多组镜检实测对比，从研磨、梯度分层纯化、缓冲液、过滤耗材全流程验证最优实验方案。核维塔生物全套样本前处理耗材（细胞筛 + 组织抽核缓冲），兼顾实验效率与细胞核品质，实测过滤纯化效果优于市面同类耗材。我们支持免费寄送细胞筛、提核试剂样品供实验室平行对照测试，配套完整质检，现货快速交付，助力各大科研平台、生物医药企业实现样本前处理耗材国产化降本增效，试样、批量报价、定制需求可随时咨询。